همسانه سازی ژن فیوژن پروتئین ویروس بیماری نیوکاسل در شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان در لاین سلولی حشره

نویسندگان

محمد صادق هاشم زاده

mohammad sadegh hashemzadeh applied virology research center, baghiatallah medical sciences institute, baghiyatallah university of medical sciences, tehran, iranپژوهشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایران محمد رضا شفاعتی

mohammad reza shafaati department of microbiology, damghan branch, islamic azad university, damaghan, iranگروه میکروب شناسی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان، دامغان، ایرانسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (baqiyatallah university of medical sciences) روح الله درستکار

ruhollah dorostkar applied virology research center, baghiatallah medical sciences institute, baghiyatallah university of medical sciences, tehran, iranپژوهشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران، ایرانسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی دامغان (islamic azad university of damghan)

چکیده

زمینه و هدف: ویروس بیماری نیوکاسل (new castle disease virus) از مهم ترین عوامل بیماری زا در طیور است و واکسیناسیون هم چنان به عنوان راهکاری مؤثر برای کنترل این بیماری مطرح است. فیوژن پروتئین (f) قرار گرفته روی سطح ویروس بیماری نیوکاسل، در بیماری زایی این ویروس نقش اساسی دارد و می تواند به تنهایی باعث القاء ایمنی محافظتی گردد. با این پیش زمینه، هدف ما، تولید یک سازه نوترکیب (کد کننده پروتئین f) از شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان آن در لاین سلولی حشره بود. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا ژن کامل f از سویه غیر بیماری زای لاسوتا ویروس بیماری نیوکاسل، به منظور تولید رشته dna مکمل (cdna)، با تکنیک rt-pcr فراوان سازی گردید. محصول تکثیر، در وکتور کلونینگ a/t و سپس در پلاسمید دهنده pfastbac dual همسانه سازی گردید. بعد از تأیید فرآیند کلونینگ با دو روش pcr و آنالیز هضم آنزیمی، صحت توالی با روش تعیین توالی تأیید شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژن f متعاقباً در سویه باکتریایی bac10dh تولید و سازه فوق با یک پنل اختصاصی pcr با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن f و پرایمرهای عمومی 13m مورد تأیید قرار گرفت. یافته ها: تحلیل تست های تأییدی نشان داد که سازه نوترکیب بکمیدی- بیان کننده ژن پروتئین f با توالی و چارچوب صحیح- با موفقیت ساخته شده است. نتیجه گیری: محصول این سازه نوترکیب واجد ژن f علاوه بر کاربرد مستقل در القاء ایمنی محافظتی می تواند به همراه محصول دیگر باکیولوویروس های نوترکیب- بیان کننده ژن های hn و np برای تولید ذره شبه ویروسی (virus-like particle,vlp) ویروس فوق در لاین سلولی حشره- مورد استفاده قرار گیرد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

ساخت وکتور حاوی فیوژن ژن vp1 ویروس بیماری تب برفکی و ژن hsp70 و بررسی بیان پروتئین آن

dna واکسن یک روش جدید ایجاد آنتی بادی ویژه – آنتی ژن و ایمنی بواسطه – سلول است. طرح اساسی dna واکسن یک ژن هدف- کاملا ساده کلون شده درون یک وکتور بیانی است. اتصال آنتی ژنها به hsp70 روش بالقوه ای برای افزایش تاثیر واکسن های dna می باشد. مکانیسم مولکولی آغازگر پاسخ های بالقوه ایمنی توسط hspها مبتنی بر این واقعیت است کهhspها ادجوانتهای طبیعی هستند و میتوانند سلولهای پردازشگر آنتی ژن را فعال کنند. ...

ساخت وکتور بیان پروتئین پوششی ویروس pvx به منظور تولید آنتی ژن اختصاصی ویروس در باکتری

تشخیص ویروس¬ها با استفاده از آنتی¬بادی¬های اختصاصی اهمیت ویژه¬ای برای کنترل بیماری¬های گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب¬زمینی دارد. یکی از مهمترین ویروس¬های سیب¬زمینی potato x potexvirus (pvx) با گستره جهانی می¬باشد. در این تحقیق به منظور تولید آنتی¬بادی اختصاصی pvx ژن coat protein (cp) آن به صورت نو¬ترکیب بیان گردید. برای این منظور ابتدا واکنش rt-pcr ¬با استفاده از آغاز¬گر¬های اختصاصی cp حا...

15 صفحه اول

جداسازی و کلونینگ ژن نورآمینیداز ویروس آنفلوانزا a (h۱n۱ سویهnew caledonia ) در وکتور بکمید به منظور ساخت باکیولوویروس نوترکیب

زمینه و هدف: در سال‎های اخیر ویروس آنفلوانزا باعث عفونت‎های متوسط تا شدید با میزان پراکندگی وسیع در سرتاسر دنیا شده است. بر این اساس، واکسن آنفلوانزایی که تنها یک دوز آن محافظت ایجاد نماید هنوز در دسترس نیست. بنابراین، تهیه یک واکسن عمومی و فراگیر بر اساس ذرات شبه ویروسی غیرتکثیری ایده‎ال می‎باشد. در تحقیق حاضر یکی از سازه‎های مولکولی برای ساخت این ذرات مد نظر قرار گرفته است. مواد و روش‎ها: در ...

متن کامل

طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری

Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...

متن کامل

شناسایی ژن F ویروس بیماری نیوکاسل جدا شده از اپیدمی های اخیر بیماری در ایران

مقدمه: بیماری نیوکاسل عفونتی فوق العاده مسری در بسیاری از گونه های طیور می باشد. ویروس بیماری نیوکاسل متعلق به خانواده پارامایکسوویریده و جنس رابولوویریده است. از پوشش این ویروس دو نوع زائده سطحی(خار) خارج شده است که یکی از آن ها گلیکوپروتئین امتزاجی(F) است و مسئول امتزاج سلولی، همولیز و نفوذ ویروس است. شکست پذیری مولکول FO با خاصیت بیماری زایی ویروس ها در درون طیور ارتباط مستقیم دارد. هدف از ا...

متن کامل

کلونینگ ژن پروتئین F ویروس نیوکاسل و تعیین توالی آن

ویروس عامل بیماری نیوکاسل (NDV) یکی از مهمترین عوامل بیماری های ویروسی طیور می باشد ، که سبب واگیری و مرگ ومیر شدید در طیور و گونه های متعددی از پرندگان می شود.پروتئین F ویروس جهت نفوذ و تکثیر ویروسی در حیوانات آلوده نقش محوری دارد. کلونینگ و بیان ژنوم کد کننده پروتئین F جهت تولید واکسن تحت واحد و همجچنین تولید آنتی بادی مونوکلنال علیه پروتئین F می تواند گتمهای جدیدیبرای شناسایی و پیشگیری از بی...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی اراک

جلد ۱۸، شماره ۲، صفحات ۸۰-۸۹

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023